当今大多数制药和医疗设备制造商都使用来自马蹄蟹血液的鲎血细胞裂解液 (LAL) 来检测细菌内毒素。该测试对于检测危险和潜在致命的污染物至关重要，但从可持续性的角度来看，它给马蹄蟹种群带来了压力。螃蟹是地球上最灵敏、最无与伦比的天然内毒素检测试剂。根据渔业管理厂 (FMP) 的要求，生物医学行业收集和放血的大多数马蹄蟹会被活体释放到收集它们的水域；然而，这些螃蟹中有一部分会死于程序1。出于这个原因，近年来已经开发了一些替代细菌内毒素的方法。重组因子C (rFC) 和重组级联试剂 (rCR) 就是两种不使用马蹄蟹血液的替代方法。
rFC是马蹄蟹血液凝固机制中的第一个凝血酶，rFC方法是基于该C因子的克隆。其工作原理是让荧光读数仪扩增荧光底物以检测内毒素的存在。根据USP <85>细菌内毒素检测和USP第<1225>章药典程序验证2的要求，FDA已将rFC认可为替代方法，但仍需要与更常见的药典BET方法进行等效性测试。
重组级联试剂 (rCR) 利用与在马蹄蟹血液中发现的传统LAL试剂相同的因子，但由于使用的是重组制造工艺3，因而被视为一种替代方法。该方法使用包含所有凝血因子的重组试剂，并在吸光度读数仪上使用传统的动力学测定法，因此是一种非动物源性BET检测。采用这种检测方法的公司还必须通过与rFC相同的验证/等效性测试。
尽管这些方法对马蹄蟹种群更具可持续性，但验证和实施BET的替代方法可能既耗时又严格，这促使许多公司想要寻找一种更简单的可持续性选择来测试产品的内毒素。
Sievers Eclipse细菌内毒素检测 (BET) 平台是一种在减少LAL用量和遵守药典方面具有显著优势的解决方案。虽然不是替代方法，但通过执行完整的IQ/OQ/PQ协议以及类似于USP <1225>要求的强大测试和验证，用户可对其验证结果充满信心。Eclipse使用市售的、FDA许可的马蹄蟹LAL，但与传统LAL方法（如96孔板和凝胶凝块）相比，LAL的使用量减少了90%。在开发Eclipse时，我们设计了一种超现代的微孔板，可利用向心力、计量室和微流体通道促进LAL和样品的准确和快速分散。该微流控系统使用与传统内毒素检测相同的生物化学成分，但将手动操作量降至最低，一致性更高，并且大幅减少了LAL的消耗——如前文所述，最多可减少90%。
Sievers Eclipse细菌内毒素检测 (BET) 平台正迅速成为BET的首选检测方法，因为使用这种方法的制药和医疗器械制造商能够保护宝贵的自然资源，并实现可持续发展目标，同时遵守USP <85>、EP 2.6.14和JP 4.01协调全球药典的严格分析和监管要求。
LAL测试方法比较
作者： Hayden Skalski - Sievers分析仪生命科学产品应用专家，Veolia水务技术与方案
Hayden是Sievers分析仪产品线的生命科学产品应用专家，专门研究细菌内毒素检测 (BET)。Hayden在制药行业和质量控制微生物学领域拥有超过8年的经验，并就内毒素检测的众多主题发表过演讲。此前，Hayden曾在Charles River Laboratories、Regeneron和Novartis任职，负责验证和执行内毒素检测的方法开发方案，提供客户支持、故障排除和支持大批量产品测试。Hayden拥有奥尔巴尼大学 (SUNY) 生物学学士学位。
- 参考文献
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1. 大西洋国家海洋渔业委员会（未注明日期）。《马蹄蟹》。摘自http://www.asmfc.org/species/horseshoe-crab
2. 美国卫生与公众服务部食品和药物管理局（2012年6月）。《行业指南：热原和内毒素检测：问与答》
3. 科德角协会（未注明日期）。《重组鲎试剂PyroSmart NextGen™使用说明》。